家蚕核型多角体病毒IE1的多克隆抗体制备及鉴定

董战旗,张军,胡楠,鲁成,潘敏慧

doi:10.13718/j.cnki.xdzk.2014.10.013

西南大学学报（自然科学版）

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家蚕核型多角体病毒IE1的多克隆抗体制备及鉴定

董战旗,张军,胡楠,鲁成,潘敏慧. 家蚕核型多角体病毒IE1的多克隆抗体制备及鉴定[J]. 西南大学学报（自然科学版）, 2014, 36(10): 076-081. doi: 10.13718/j.cnki.xdzk.2014.10.013

引用本文:

Citation:

家蚕核型多角体病毒IE1的多克隆抗体制备及鉴定

董战旗,张军,胡楠,鲁成,潘敏慧

1. 家蚕基因组生物学国家重点实验室;2. 农业部家蚕功能基因组和生物学重点实验室,西南大学,重庆400716

摘要: 家蚕核型多角体病毒(BmNPV)ie1 基因是BmNPVDNA复制的必需基因,其编码的IE1蛋白能够反式转录激活杆状病毒早期基因的表达.为了进一步研究IE1蛋白在家蚕核型多角体病毒感染宿主过程中具体的功能,研究通过PCR扩增BmNPVie1 基因片段,亚克隆到原核表达载体pET32,获得重组质粒pET32-IE1,经测序正确后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株.通过IPTG诱导融合蛋白原核表达后,初步纯化收集抗原,免疫新西兰大白兔,制备IE1多克隆抗体.应用制备的免疫兔血清进行Western-blot分析,结果显示多克隆抗体能特异识别BmNPV的IE1和IE0蛋白.免疫荧光结果同样显示IE1蛋白定位于宿主细胞核病毒复制中心.IE1抗体制备的成功为进一步研究IE1在病毒感染家蚕中的作用机理奠定了基础.
- 家蚕 /
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- 多克隆抗体

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家蚕核型多角体病毒IE1的多克隆抗体制备及鉴定

董战旗,张军,胡楠,鲁成,潘敏慧

1. 家蚕基因组生物学国家重点实验室;2. 农业部家蚕功能基因组和生物学重点实验室,西南大学,重庆400716

关键词:

摘要: 家蚕核型多角体病毒(BmNPV)ie1 基因是BmNPVDNA复制的必需基因,其编码的IE1蛋白能够反式转录激活杆状病毒早期基因的表达.为了进一步研究IE1蛋白在家蚕核型多角体病毒感染宿主过程中具体的功能,研究通过PCR扩增BmNPVie1 基因片段,亚克隆到原核表达载体pET32,获得重组质粒pET32-IE1,经测序正确后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株.通过IPTG诱导融合蛋白原核表达后,初步纯化收集抗原,免疫新西兰大白兔,制备IE1多克隆抗体.应用制备的免疫兔血清进行Western-blot分析,结果显示多克隆抗体能特异识别BmNPV的IE1和IE0蛋白.免疫荧光结果同样显示IE1蛋白定位于宿主细胞核病毒复制中心.IE1抗体制备的成功为进一步研究IE1在病毒感染家蚕中的作用机理奠定了基础.