火龙果MSAP体系的优化及组培苗DNA甲基化检测

刘鹏飞;乔光;刘涛;彭志军;蔡永强;文晓鹏;

doi:10.13718/j.cnki.xdzk.2016.09.006

西南大学学报（自然科学版）

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火龙果MSAP体系的优化及组培苗DNA甲基化检测

刘鹏飞;乔光;刘涛;彭志军;蔡永强;文晓鹏;. 火龙果MSAP体系的优化及组培苗DNA甲基化检测[J]. 西南大学学报（自然科学版）, 2016, 38(9): 34-40. doi: 10.13718/j.cnki.xdzk.2016.09.006

引用本文:

Citation:

火龙果MSAP体系的优化及组培苗DNA甲基化检测

刘鹏飞;乔光;刘涛;彭志军;蔡永强;文晓鹏;

贵州大学农业生物工程研究院山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室; 贵州省果树科学研究所;

摘要: 以火龙果组培苗为材料,采用正交实验设计,优化了适用于火龙果的MSAP体系.结果表明,基因组DNA约300ng,采用EcoRI 10U和MspI/HpaII 2.5U两步酶切法,酶切较充分;使用20μL预扩增体系,含酶连产物1.0μL,Mix 10μL,上下游引物E+A/HM+T各2.0μL;选择性扩增反应体系20μL,含稀释50倍的预扩增产物3.0μL,Mix 5μL,上下游引物E+ANN/HM+TNN各2.0μL.选用17对引物检测发现,组培苗CCGG位点的甲基化程度约为24%,平均多态性比率为1.8%,表明火龙果组培苗在短期无性系繁殖中,存在一定程度的DNA甲基化差异.
- 火龙果 /
- 组培苗 /
- MSAP /
- DNA甲基化

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火龙果MSAP体系的优化及组培苗DNA甲基化检测

刘鹏飞;乔光;刘涛;彭志军;蔡永强;文晓鹏;

贵州大学农业生物工程研究院山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室; 贵州省果树科学研究所;

关键词:

火龙果 /
组培苗 /
MSAP /
DNA甲基化

摘要: 以火龙果组培苗为材料,采用正交实验设计,优化了适用于火龙果的MSAP体系.结果表明,基因组DNA约300ng,采用EcoRI 10U和MspI/HpaII 2.5U两步酶切法,酶切较充分;使用20μL预扩增体系,含酶连产物1.0μL,Mix 10μL,上下游引物E+A/HM+T各2.0μL;选择性扩增反应体系20μL,含稀释50倍的预扩增产物3.0μL,Mix 5μL,上下游引物E+ANN/HM+TNN各2.0μL.选用17对引物检测发现,组培苗CCGG位点的甲基化程度约为24%,平均多态性比率为1.8%,表明火龙果组培苗在短期无性系繁殖中,存在一定程度的DNA甲基化差异.