柔嫩艾美耳球虫A08基因的阶段表达分析与毕赤酵母表达系统构建

平宪卿,韩红玉,黄兵,姜连连,董辉,赵其平,李洋,郭涛,朱顺海

西南大学学报（自然科学版）

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柔嫩艾美耳球虫A08基因的阶段表达分析与毕赤酵母表达系统构建

平宪卿,韩红玉,黄兵,姜连连,董辉,赵其平,李洋,郭涛,朱顺海. 柔嫩艾美耳球虫A08基因的阶段表达分析与毕赤酵母表达系统构建[J]. 西南大学学报（自然科学版）, 2011, 33(6).

引用本文:

Analysis of the Expression of A08 Gene in Eimeria tenella at Different Developmental Stages and Construction of Its Expression System in Pichia pastoris[J]. Journal of Southwest University Natural Science Edition, 2011, 33(6).

Citation:

Analysis of the Expression of A08 Gene in Eimeria tenella at Different Developmental Stages and Construction of Its Expression System in Pichia pastoris[J]. Journal of Southwest University Natural Science Edition, 2011, 33(6).

柔嫩艾美耳球虫A08基因的阶段表达分析与毕赤酵母表达系统构建

平宪卿,韩红玉,黄兵,姜连连,董辉,赵其平,李洋,郭涛,朱顺海

中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室,上海,200241

Analysis of the Expression of A08 Gene in Eimeria tenella at Different Developmental Stages and Construction of Its Expression System in Pichia pastoris

摘要: 对A08蛋白基因在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)的转录情况进行分析,同时以A08蛋白cDNA为模板扩增出1 083 bp的目的基因片段,将该基因连接到pGEM-T-easy载体上,经序列测定和双酶切鉴定表明为A08基因.用EcoR Ⅰ和Not Ⅰ酶切回收目的片段连接至用同样酶切的真核表达载体pPIC9k上,构建了重组质粒pPIC9k-A08,转化大肠杆菌TOP10后,提取质粒,经酶切鉴定正确后用Sac Ⅰ将重组质粒线性化,再电转入毕赤酵母GS115菌株,G418筛选抗性重组子,经PCR鉴定正确重组子后做甲醇诱导表达.RT-PCR结果显示该基因在子孢子阶段的转录拷贝数显著高于其他发育阶段,是一个子孢子高表达基因.重组酵母诱导表达产物经SDS-PAGE检测证实,柔嫩艾美耳球虫A08基因在毕赤酵母中获得表达.Western-blot初步分析表明,表达产物具有免疫学反应活性.
- A08基因,柔嫩艾美耳球虫,荧光实时定量PCR,半赤酵母,表达

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柔嫩艾美耳球虫A08基因的阶段表达分析与毕赤酵母表达系统构建

平宪卿,韩红玉,黄兵,姜连连,董辉,赵其平,李洋,郭涛,朱顺海

中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室,上海,200241

关键词:

A08基因,柔嫩艾美耳球虫,荧光实时定量PCR,半赤酵母,表达

摘要: 对A08蛋白基因在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)的转录情况进行分析,同时以A08蛋白cDNA为模板扩增出1 083 bp的目的基因片段,将该基因连接到pGEM-T-easy载体上,经序列测定和双酶切鉴定表明为A08基因.用EcoR Ⅰ和Not Ⅰ酶切回收目的片段连接至用同样酶切的真核表达载体pPIC9k上,构建了重组质粒pPIC9k-A08,转化大肠杆菌TOP10后,提取质粒,经酶切鉴定正确后用Sac Ⅰ将重组质粒线性化,再电转入毕赤酵母GS115菌株,G418筛选抗性重组子,经PCR鉴定正确重组子后做甲醇诱导表达.RT-PCR结果显示该基因在子孢子阶段的转录拷贝数显著高于其他发育阶段,是一个子孢子高表达基因.重组酵母诱导表达产物经SDS-PAGE检测证实,柔嫩艾美耳球虫A08基因在毕赤酵母中获得表达.Western-blot初步分析表明,表达产物具有免疫学反应活性.