限制性内切酶MluⅠ基因的合成、克隆和初步表达

覃鸿妮;钱莉春;沈晓燕;梅啸;

doi:10.13718/j.cnki.xsxb.2016.10.008

西南师范大学学报(自然科学版)

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限制性内切酶MluⅠ基因的合成、克隆和初步表达

覃鸿妮;钱莉春;沈晓燕;梅啸;. 限制性内切酶MluⅠ基因的合成、克隆和初步表达[J]. 西南师范大学学报(自然科学版), 2016, 41(10): 46-53. doi: 10.13718/j.cnki.xsxb.2016.10.008

引用本文:

Citation:

限制性内切酶MluⅠ基因的合成、克隆和初步表达

覃鸿妮;钱莉春;沈晓燕;梅啸;

苏州工业园区服务外包职业学院; 苏州金唯智生物科技有限公司;

摘要: 在已知基因序列但缺乏DNA模版的情况下,人工设计合成多条引物,采用重叠PCR技术体外人工合成899bp的MluⅠ基因和1 312bp的M.MluⅠ基因.并将合成的MluⅠ基因连接到表达载体pet30a上,重组表达载体构成pet30a-MluⅠ,将M.MluⅠ基因连接到表达载体PUC19上,重组表达载体构成PUC19-M.MluⅠ.测序结果显示,载体构建成功后利用体外重组转化技术,将pet30a-MluⅠ和PUC19-M.MluⅠ转入T7expression E.coli表达菌株中.重组工程菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE鉴定,发现限制性内切酶MluⅠ成功表达.该酶的成功表达不仅为后续研究提供了材料,而且为实验室制备限制性内切酶在方法上开辟了新的途径,为更多新发现的内切酶基因的成功克隆提供了参考.
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限制性内切酶MluⅠ基因的合成、克隆和初步表达

覃鸿妮;钱莉春;沈晓燕;梅啸;

苏州工业园区服务外包职业学院; 苏州金唯智生物科技有限公司;

关键词:

摘要: 在已知基因序列但缺乏DNA模版的情况下,人工设计合成多条引物,采用重叠PCR技术体外人工合成899bp的MluⅠ基因和1 312bp的M.MluⅠ基因.并将合成的MluⅠ基因连接到表达载体pet30a上,重组表达载体构成pet30a-MluⅠ,将M.MluⅠ基因连接到表达载体PUC19上,重组表达载体构成PUC19-M.MluⅠ.测序结果显示,载体构建成功后利用体外重组转化技术,将pet30a-MluⅠ和PUC19-M.MluⅠ转入T7expression E.coli表达菌株中.重组工程菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE鉴定,发现限制性内切酶MluⅠ成功表达.该酶的成功表达不仅为后续研究提供了材料,而且为实验室制备限制性内切酶在方法上开辟了新的途径,为更多新发现的内切酶基因的成功克隆提供了参考.