-
弓形虫病(Toxoplasmosis)是一种危害极其严重的人兽共患寄生虫病,其病原刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)几乎能感染所有的脊椎动物,包括人和牛,主要引起流产、死胎、产畸形胎儿.家畜弓形虫感染不仅给养殖业带来巨大的经济损失,更因其能通过动物的肉和奶等产品直接或间接地传染给人而严重威胁人类的健康,因此监测家畜弓形虫的流行情况并分析影响其感染的危险性因素具有重要意义.
自2008年,重庆被纳入国家《优势农产品区域布局规划》肉牛和肉羊优势产业带建设的重点区域,到2015年牛的存栏量为148.58万头,出栏量达151.43万头,养牛业已成为重庆市畜牧支柱产业,掌握重庆市牛弓形虫的感染情况,有利于减少该病原感染所致经济损失及传播给人类的风险.本试验按分析流行病学的“病例-对照研究”方法,对采集自重庆市荣昌、涪陵、黔江、长寿、梁平、巫山、云阳、开州、潼南和江津10区县的345份牛血清样本进行牛弓形虫感染调查,同时以性别、年龄、养殖场是否有犬猫和海拔为因素分析该地区影响牛弓形虫感染的危险性因素.
全文HTML
-
T. gondii Antibody Test Kit (Toxo Ab)(生产批号20150715),购于美国IDEXX爱德士生物科技.
-
AMR-100型全自动酶标分析仪、GHP-9050型隔水式恒温培养箱.
-
根据重庆市区域及地理特点[2],从荣昌、江津、潼南、长寿、涪陵、梁平、云阳和巫山等10个区县,随机选取不同品种和年龄的牛作为采样对象.用一次性注射器自牛颈静脉或尾根静脉采集血液,分离血清于-20 ℃保存待检.
-
按照T. gondii Antibody Test Kit (Toxo Ab)试剂盒说明书进行操作,最后置酶标仪450 nm处测各孔吸光度(OD)值.结果判定按照
其中:a为样品OD450值;b为阳性对照OD450值;c为阴性对照OD450值.
结果判定:S/P≥100%为阳性;30%≤S/P<100%为弱阳性;20%≤S/P<30%为可疑;S/P<20%为阴性.
-
计算不同区县和不同品种牛弓形虫的感染率及95%置信度(95% Confience interval,95% CI),以及不同性别、品种、年龄、海拔(≥500 m为山地,<500 m为丘陵[1])、温度和有无犬猫等因素下牛弓形虫感染的比值比(Odds ratio,OR)和卡方值(χ2).按表 1标准判定所分析因素与牛弓形体病流行的关联性.
其中:X为病例组暴露数;Y为病例组非暴露数;W为对照组暴露数;Z为对照组非暴露数.
1.1. 主要试剂
1.2. 仪器设备
1.3. 样本采集
1.4. 弓形虫抗体阳性检测
1.5. 数据的统计分析
-
在所调查的345份牛血清样品中,弓形虫抗体检测阳性的样品有94份,不同区县弓形虫抗体阳性率在10.71%~40.63%之间,平均阳性率为27.25%(表 2);在不同的牛品种中,以黑白花奶弓形虫抗体最高,达38.18%,而鲁西黄牛的弓形虫抗体阳性率最低为21.12%(表 3).
-
重庆地区母牛的弓形虫抗体阳性率(36.71%)显著高于公牛(19.25%)(OR=2.43,X2=13.17,95% CI=1.50~3.96,p=0.000);成年牛的弓形虫抗体阳性率(31.06%)显著高于幼年牛(14.81%)(OR=2.59,X2=8.25,95% CI=1.33~1.50,p=0.004);有犬猫牛弓形虫抗体阳性率(29.90%)高于无犬猫(23.40%),500 m以下海拔(丘陵地带)的牛弓形虫抗体阳性率(23.28%)低于500 m以上海拔(山地),温热季节的牛弓形虫抗体阳性率(26.44%)低于寒冷季节(28.07%),但差异不显著(表 4).
2.1. 重庆部分地区牛弓形虫血清抗体检测结果
2.2. 重庆地区牛感染弓形虫的危险性因素分析
-
国内外已经有许多关于牛感染弓形虫的研究报道,而不同国家和地区该病原的感染率有较大的差异.据报道西班牙牛弓形虫血清阳性率达到83.3%[3],巴西中部和北部为48.5%~71.0%[4],尼日利亚为13.91%[5],而韩国庆尚北道省仅为0.50%[6].国内不同地区牛弓形虫感染率在2.6%~52.50%之间,其中西南地区(贵州黔南和四川)最高,平均为22.40%,其次为西北地区20.56%,华东地区12.5%,东北地区10.48%,华南地区9.7%,华中地区5.38%,华北地区4.29%[7].本研究首次对西南地区的重庆市进行牛弓形虫血清抗体水平调查,发现其平均抗体阳性率为27.25%,超过我国各个地区的平均值,甚至达到华北、华中等地区平均值的4~5倍,表明重庆地区牛感染弓形虫较普遍,在临床上需要引起足够的重视.重庆地区牛弓形虫感染水平较高的原因可能与该地区气候炎热、温湿多雨水,更利于弓形虫卵囊在外界长时间的存活有关,这同Sarvi等[8]报道的与伊朗相邻,温暖多雨的埃及和阿富汗等国家牛弓形虫感染率远远高于伊朗的情况类似.
对重庆地区牛弓形虫感染危险性因素进行分析发现,成年牛感染率是幼年牛感染率的2.59倍,表明重庆地区年龄因素对牛弓形虫病流行有中等程度的关联,与Qin等[9]、Sun等[10]和Navidpour等[11]报道一致,其原因可能与成年牛在生长过程中接触被犬猫排出卵囊污染的饲草和饮水机会增多,以及弓形虫在群体间的水平传播有关.在性别方面,母牛弓形虫感染率显著高于公牛,是公牛弓形虫感染率的1.40倍,表明重庆地区性别因素对牛弓形虫病流行有中等程度的关联,与De Souza等[4]和Qin等[9]报道牛弓形虫感染与性别无关联有区别,分析其原因可能是此次采集血液样本的母牛多为奶牛,其年龄较大,因年龄因素导致母牛感染率略高于公牛.在有无犬猫方面,发现有犬猫牛弓形虫的感染率是无犬猫的1.40倍,表明重庆地区有犬猫对牛弓形虫病流行有较弱的关联,与Magalhaes等[12]报道在巴西费尔南多-迪诺罗尼亚岛有猫的牛场牛弓形虫阳性率是无犬猫的5.76倍,以及Zhang等[13]报道犬猫对牛弓形虫病的流行有较强的关联有一定差异,其原因可能是后两位学者报道中调查的多数牛场均采用半集约化管理模式,增大了牛羊接触被犬猫粪便污染土壤的机会,而重庆地区牛均采用集约化养殖,减少了牛接触被犬猫粪便污染土壤的机会,所以弓形虫病流行与犬猫的存在关联较弱,Albuquerque等[14]和Brasil等[15]关于半集约化养殖方式牛弓形虫感染率远远高于集约化养殖方式的报道,也在一定程度上印证以上分析.此外,重庆部分调查地区流浪犬和猫的存在也可能弱化了养殖场自身有无犬猫对牛弓形虫感染率的影响.在海拔方面,丘陵地带是山地感染率的0.64倍,表明重庆地区海拔与牛弓形虫的感染率有中等程度关联.值得注意的是在此次调查中,课题组发现重庆地区每个养牛场都至少诊断出一例弓形虫阳性,如果以每个养牛场作为1个流行病学调查单元,其感染率将达到100%.这与Silva等[16]和Jokelainen等[17]报道巴西和爱沙尼亚等地牛弓形虫病调查的情况一致.因此,重庆地区牛弓形虫高感染率应引起相关部门的高度重视.对于牛弓形虫病的防控,主要应加强饲养管理,搞好圈舍环境卫生,在圈舍周围隔离犬、猫等动物,同时加强牛场弓形虫病的检疫,严防弓形虫病的传播,确保公共卫生安全.