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人组织型纤溶酶原激活剂原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的初步表达

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杨震,杨可,侯曼美,景丽丽,张睿,张丽,雷寒,何通川,周建中. 人组织型纤溶酶原激活剂原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的初步表达[J]. 西南大学学报（自然科学版）, 2012, 34(4): 071-077.
引用本文: 杨震,杨可,侯曼美,景丽丽,张睿,张丽,雷寒,何通川,周建中. 人组织型纤溶酶原激活剂原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的初步表达[J]. 西南大学学报（自然科学版）, 2012, 34(4): 071-077.
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Citation: C o n s t r u c t i o no f t h eP r o k a r y o t i cE x p r e s s i o nV e c t o ro fH u m a nT i s s u e - T y p eP l a s m i n o g e nA c t i v a t o ra n dI t sP r e l i m i n a r yE x p r e s s i o n i nE s c h e r i c h i a c o l i[J]. Journal of Southwest University Natural Science Edition, 2012, 34(4): 071-077.
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人组织型纤溶酶原激活剂原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的初步表达

  • 重庆医科大学 附属第一医院心血管内科,重庆4 0 0 0 1 6;西南大学 现代生物医药研究所,重庆4 0 0 7 1 5;美国芝加哥大学 分子肿瘤实验室,芝加哥6 0 6 3 7

C o n s t r u c t i o no f t h eP r o k a r y o t i cE x p r e s s i o nV e c t o ro fH u m a nT i s s u e - T y p eP l a s m i n o g e nA c t i v a t o ra n dI t sP r e l i m i n a r yE x p r e s s i o n i nE s c h e r i c h i a c o l i

  • 摘要: 目的:构建人组织型纤溶酶原激活剂( t i s s u e - t y p ep l a s m i n o g e na c t i v a t o r,t P A) 原核表达载体,检测其在大肠杆菌E s c h e r i c h i a c o l i中的初步表达.方法:以含有人t P A基因的质粒为模板,设计引物扩增出含有R G D S - t P A基因并构建到原核表达载体p E T 2 8 a中,测序证实为正确的r t P A序列,并将p E T 2 8 a - t P A转化至菌株E . c o l iB L 2 1( D E 3).用I P T G诱导r t P A在E . c o l i中表达,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳( S D S - P A G E) 进行验证.结果:琼脂糖凝胶电泳获得目的基因片段t P A的条带约在17 0 0b p处,鉴定为阳性重组体;聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定获得目的蛋白片段r t P A的条带约5 3K D a,为非活性的包涵体.结论:人组织型纤溶酶原激活剂原核表达载体构建成功,可在大肠杆菌中有效表达.
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出版历程

人组织型纤溶酶原激活剂原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的初步表达

  • 重庆医科大学 附属第一医院心血管内科,重庆4 0 0 0 1 6;西南大学 现代生物医药研究所,重庆4 0 0 7 1 5;美国芝加哥大学 分子肿瘤实验室,芝加哥6 0 6 3 7

摘要: 目的:构建人组织型纤溶酶原激活剂( t i s s u e - t y p ep l a s m i n o g e na c t i v a t o r,t P A) 原核表达载体,检测其在大肠杆菌E s c h e r i c h i a c o l i中的初步表达.方法:以含有人t P A基因的质粒为模板,设计引物扩增出含有R G D S - t P A基因并构建到原核表达载体p E T 2 8 a中,测序证实为正确的r t P A序列,并将p E T 2 8 a - t P A转化至菌株E . c o l iB L 2 1( D E 3).用I P T G诱导r t P A在E . c o l i中表达,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳( S D S - P A G E) 进行验证.结果:琼脂糖凝胶电泳获得目的基因片段t P A的条带约在17 0 0b p处,鉴定为阳性重组体;聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定获得目的蛋白片段r t P A的条带约5 3K D a,为非活性的包涵体.结论:人组织型纤溶酶原激活剂原核表达载体构建成功,可在大肠杆菌中有效表达.

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