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牛蒡子配方颗粒制备与牛蒡子苷元质量分数测定研究

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曾珍, 李玲, 杨帆, 等. 牛蒡子配方颗粒制备与牛蒡子苷元质量分数测定研究[J]. 西南大学学报（自然科学版）, 2019, 41(2): 27-32. doi: 10.13718/j.cnki.xdzk.2019.02.004
引用本文: 曾珍, 李玲, 杨帆, 等. 牛蒡子配方颗粒制备与牛蒡子苷元质量分数测定研究[J]. 西南大学学报（自然科学版）, 2019, 41(2): 27-32. doi: 10.13718/j.cnki.xdzk.2019.02.004
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Zhen ZENG, Ling LI, Fan YANG, et al. Study on Preparation of Fructus arctii Formulated Granules and Determination of Arctigenin in Them[J]. Journal of Southwest University Natural Science Edition, 2019, 41(2): 27-32. doi: 10.13718/j.cnki.xdzk.2019.02.004
Citation: Zhen ZENG, Ling LI, Fan YANG, et al. Study on Preparation of Fructus arctii Formulated Granules and Determination of Arctigenin in Them[J]. Journal of Southwest University Natural Science Edition, 2019, 41(2): 27-32. doi: 10.13718/j.cnki.xdzk.2019.02.004
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牛蒡子配方颗粒制备与牛蒡子苷元质量分数测定研究

  • 重庆理工大学 药学与生物工程学院, 重庆 400054

  • 基金项目: 重庆市科委重点项目（CSTC2014zkjccxyyBX0034）
详细信息
    作者简介:

    曾珍(1993-), 女, 硕士研究生, 主要从事天然药物的研究 .

    通讯作者: 胥秀英, 教授; 

  • 中图分类号: Q949.783.5;R283.6

Study on Preparation of Fructus arctii Formulated Granules and Determination of Arctigenin in Them

  • College of Pharmaceutical and Biological Engineering, Chongqing University of Technology, Chongqing 400054, China

  • 摘要: 对牛蒡子配方颗粒制备工艺筛选及牛蒡子苷元质量分数进行测定，采用正交优化方法进行处方筛选，HPLC法测定牛蒡子苷元质量分数.色谱条件：色谱柱：Dionex C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇与水的比例为40：60；流速：1.0 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：室温.结果表明，牛蒡子颗粒的最佳制备工艺：物料比即牛蒡子提取物、糊精、淀粉比例为3：6：1，润湿剂：85%乙醇，干燥温度：65℃.在上述色谱条件下牛蒡子苷元在1.41 μg~7.05 μg范围内线性关系良好，r=0.999 9.方法回收率100.09%，RSD为2.19%.该方法可为牛蒡子相关制剂的开发和质量研究提供参考.
    Abstract: To screen for the optimal preparation process of Fructus arctii formulated granules and to determine the arctigenin content in them. The orthogonal optimization method was used to screen the prescriptions and HPLC was performed to determine the arctigenin content. Analysis was carried out with Dionex C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm), the mobile phase was CH3OH-H2O (40:60), the flow rate was 1.0 mL/min, the wave length was 280 nm and the temperature was room temperature. The optimal preparation process of F. arctii granules was as follows:The ratio of F. arctii extract:dextrin:starch was 3:6:1, the wetting agent was 85% ethanol and the temperature was 65℃. Under these conditions, it had a good linear relationship, the average recovery of arctigenin was 100.09%, and RSD was 2.19%. The method described above can be used for the development and quality control of F. arctii preparations.
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  • 图 1  对照品、供试品和阴性样品HPLC图

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    表 1  因素水平设计

    水平 因素
    A(牛蒡子、糊精、淀粉) B乙醇浓度/% C干燥温度/℃ D(空白)
    1 3:4:3 75 55 0
    2 3:5:2 80 60 0
    3 3:6:1 85 65 0
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    表 2  正交实验结果

    实验号 因素 指标颗粒合格率/%
    A B C D
    实验1 1 1 1 1 86
    实验2 1 2 2 2 97
    实验3 1 3 3 3 98
    实验4 2 1 2 3 91
    实验5 2 2 3 1 98
    实验6 2 3 1 2 97
    实验7 3 1 3 2 94
    实验8 3 2 1 3 96
    实验9 3 3 2 1 97
    K1 93.7 90.3 93.0
    K2 95.3 97.0 95.0
    K3 95.7 97.3 96.7
    极差R 2.0 7.0 3.7
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    表 3  方差分析表

    因素 偏差平方和 自由度 F值 F临界值 P显著性
    A 6.889 2 0.838 3.000 ＞0.25
    B 93.556 2 11.378 9.000 ＜0.05
    C 20.222 2 2.459 3.000 ＞0.25
    误差 8.222 2 - - -
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    表 4  验证实验结果

    编号 颗粒合格率/%
    1 95
    2 97
    3 97
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    表 5  加样回收率结果

    编号 样品质量分数/
    μg    		 标准品
    加入量/μg    		 测得量/
    μg    		 加样回收率/
    %    		 平均加样回收率/% RSD/
    %
    1 2.572 3.065 5.616 99.31 100.09 2.19
    2 2.572 3.065 5.523 96.28
    3 2.572 3.065 5.669 101.04
    4 3.550 3.065 6.602 99.58
    5 3.550 3.065 6.611 99.87
    6 3.550 3.065 6.658 101.40
    7 3.681 3.065 6.713 98.92
    8 3.681 3.065 6.745 99.97
    9 3.681 3.065 6.883 104.46
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    表 6  样品质量分数测定结果(n=3)

    编号 牛蒡子苷元质量分数/(g·kg-1)
    1 20.76
    2 21.61
    3 21.82
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  • [1] 马英华, 张晓娟.牛蒡子药物应用的研究进展[J].中医药信息, 2017, 34(2):116-119. doi: 10.3969/j.issn.1002-2406.2017.02.034
    [2] 张兴德, 张彩琴, 刘启迪, 等.牛蒡子抗肿瘤活性成分及作用机制研究进展[J].中国现代中药, 2012, 14(12):12-17. doi: 10.3969/j.issn.1673-4890.2012.12.004
    [3] 陶凯奇, 王红, 周宗宝, 等.木脂素类化合物的结构及生物活性研究进展[J].中南药学, 2017, 15(1):70-74. doi: http://www.wanfangdata.com.cn/details/detail.do?_type=perio&id=QKC20172017032300189171
    [4] 杨桠楠, 黄小英, 王尉, 等.牛蒡子中一个新木脂素类化合物[J].药学学报, 2017, 52(5):779-784. doi: http://www.wanfangdata.com.cn/details/detail.do?_type=perio&id=QKC20172017052500245469
    [5] 李雪利, 高杰, 郝磊, 等.牛蒡子配方颗粒制备工艺优化[J].亚太传统医药, 2016, 12(11):29-30. doi: 10.11954/ytctyy.201611012
    [6] 王宁, 林海珠, 刘红, 等.牛蒡子木脂素类化合物的分离与制备[J].西南师范大学学报(自然科学版), 2013, 38(8):104-107. doi: 10.3969/j.issn.1000-5471.2013.08.022
    [7] 胥秀英, 陈海芹, 郑一敏, 等.牛蒡子提取物中咖啡酰奎宁酸类化合物的分离与结构确证[J].西南大学学报(自然科学版), 2017, 39(11):172-176. doi: http://xbgjxt.swu.edu.cn/jsuns/jsuns/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=201711025&flag=1
    [8] 郑一敏, 胥秀英, 蔡绍皙, 等.牛蒡子苷对血瘀大鼠血液流变学的影响[J].中国现代应用药学, 2006, 23(6):443-446. doi: 10.3969/j.issn.1007-7693.2006.06.005
    [9] 陈海芹, 胥秀英, 张心蕊, 等. HPLC法测定牛蒡子提取物中咖啡酰奎宁酸类化合物的含量[J].北方药学2014, 11(8):12-13. doi: http://d.old.wanfangdata.com.cn/Periodical/bfyx201408008
    [10] 郑一敏, 蔡绍皙, 胥秀英, 等.牛蒡子总木脂素代谢化学及其动态研究[J].中国中药杂志, 2005, 30(6):1287-1289. doi: http://d.old.wanfangdata.com.cn/Periodical/zgzyzz200516019
    [11] 郑一敏, 蔡绍皙, 胥秀英, 等.牛蒡子苷代谢动力学与分布研究[J].中国现代应用药学, 2006, 23(4):265-267. doi: 10.3969/j.issn.1007-7693.2006.04.001
    [12] 胥秀英, 郑一敏, 傅善权, 等.牛蒡子苷在小鼠体内的分布状态及药代动力学研究[J].时珍国医国药, 2006, 17(5):698-699. doi: 10.3969/j.issn.1008-0805.2006.05.008
    [13] 杨艳红, 蔡绍皙, 郑一敏, 等.两步法制备牛蒡子苷元[J].精细化工, 2007, 24(9):885-889. doi: 10.3321/j.issn:1003-5214.2007.09.015
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图( 1) 表( 6)
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出版历程
  • 收稿日期:  2018-09-14
  • 刊出日期:  2019-02-20

牛蒡子配方颗粒制备与牛蒡子苷元质量分数测定研究

    通讯作者: 胥秀英, 教授; 
    作者简介: 曾珍(1993-), 女, 硕士研究生, 主要从事天然药物的研究
  • 重庆理工大学 药学与生物工程学院, 重庆 400054
  • 收稿日期:  2018-09-14
基金项目:  重庆市科委重点项目（CSTC2014zkjccxyyBX0034）

摘要: 对牛蒡子配方颗粒制备工艺筛选及牛蒡子苷元质量分数进行测定，采用正交优化方法进行处方筛选，HPLC法测定牛蒡子苷元质量分数.色谱条件：色谱柱：Dionex C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇与水的比例为40：60；流速：1.0 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：室温.结果表明，牛蒡子颗粒的最佳制备工艺：物料比即牛蒡子提取物、糊精、淀粉比例为3：6：1，润湿剂：85%乙醇，干燥温度：65℃.在上述色谱条件下牛蒡子苷元在1.41 μg~7.05 μg范围内线性关系良好，r=0.999 9.方法回收率100.09%，RSD为2.19%.该方法可为牛蒡子相关制剂的开发和质量研究提供参考.

English Abstract

    全文HTML

  • 牛蒡子是菊科植物牛蒡(Arctium lappa L.)的干燥成熟果实，又名恶实、大力子等，具有疏散风热、透疹解毒的功效，为我国传统中药[1].现代药理研究表明，牛蒡子具有抗肿瘤、降血糖、抗菌、抗病毒等活性[2].牛蒡子化学成分主要有木脂素、挥发油、油脂等，其中木脂素类成分能抑制血小板活化因子对血小板的结合作用[3-5].王宁、胥秀英等分别对牛蒡子中木脂素类和咖啡酰奎宁酸类化合物分离纯化与质量分数测定进行了系统研究[6-13].在此基础上，本实验以牛蒡子配方颗粒合格率为指标，采用正交优化实验进行了牛蒡子配方颗粒处方筛选及牛蒡子苷元的质量分数测定研究.

1.   材料

    1.1.   试药与仪器

  • 试剂：牛蒡子购于重庆市中药材市场；糊精、淀粉、乙醇为药用规格；牛蒡子苷元对照品购于成都普菲德生物技术有限公司(纯度≥98%)；三氯甲烷，甲醇等为市售分析纯.

    仪器：HPLC仪，岛津SPD20A.

2.   方法与结果

    2.1.   牛蒡子提取物的制备

  • 取市售牛蒡子于60 ℃干燥3h，称取500 g 3份，分别加入8倍、5倍、3倍量的水，在80~90 ℃加热提取1 h，收集3次提取液，冷至室温，再上预先处理好的D101大孔吸附树脂柱，用75%乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩干燥得牛蒡子提取物，备用.

    • 2.2.   颗粒剂的制备

  • 精密称取不同比例的牛蒡子提取物粉末和辅料过100目筛，加入相应浓度的润湿剂(乙醇)制成软材，挤压过12目筛，湿颗粒在相应温度下恒温干燥30 min.得到干燥的牛蒡子颗粒.

    • 2.3.   评价指标

  • 以牛蒡子颗粒的合格率为指标，即可通过1号筛与不过5号筛的颗粒占颗粒总质量的百分比.

    • 2.4.   正交实验设计

  • 以原辅料比例、润湿剂的浓度、干燥温度为影响因素，每个因素3个水平，采用正交实验设计L9(34)，筛选牛蒡子颗粒制剂的最优工艺.正交实验因素水平及实验结果见表 1与表 2.

    取牛蒡子提取物按表 2加入辅料，混合，加入润湿剂，搅拌，制软材，制粒，干燥.计算颗粒合格率，筛选最佳制粒工艺，结果见表 2.

    结果表明：根据综合评分结果，由直观分析可以得出影响牛蒡子颗粒的因素大小依次为B＞C＞A，结合直观分析，A3＞A2＞A1，选择A3；B3＞B2＞B1，选择B3；C3＞C2＞C1，选择C3；所以，最佳工艺参数为A3B3C3.即牛蒡子提取物、糊精、淀粉比例为3:6:1，加入润湿剂乙醇的浓度为85%，恒温干燥的温度为65 ℃.并且润湿剂的浓度对牛蒡子颗粒成型影响显著，牛蒡子与辅料的物料比对牛蒡子颗粒制剂成型的影响相对较小.结合方差分析(表 3)可知，B因素即乙醇浓度对结果影响有统计学意义，而物料比与干燥温度对结果影响无统计学意义.

    • 2.5.   正交设计验证实验

  • 按牛蒡子提取物、糊精、淀粉比例为3:6:1，加入润湿剂乙醇的浓度为85%，恒温干燥的温度为65 ℃，按“2.1”的制备方法制备3批供试品，测定颗粒合格率，结果表明该工艺稳定(表 4).

    • 2.6.   牛蒡子配方颗粒中牛蒡子苷元质量分数测定研究

    2.6.1.   色谱条件

  • 色谱柱：Dionex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水(40:60)；流速：1.0 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：室温.

    • 2.6.2.   对照品溶液的制备

  • 精密称定牛蒡苷元对照品一定量，加入甲醇溶液溶解制成浓度为0.705 mg/mL的溶液，即得.

    • 2.6.3.   供试品溶液的制备

  • 取牛蒡子配方颗粒适量，研磨成细粉，精密称取0.2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理20 min，冷至室温，用甲醇补足减失质量，混匀，滤过，取续滤液，即得.

    • 2.6.4.   阴性对照溶液的制备

  • 取缺牛蒡子的阴性样品0.2g，按“2.6.3”项下的方法制备，即得阴性对照溶液.

    • 2.6.5.   专属性实验

  • 取“2.6.2”项下的对照品溶液，“2.6.3”项下的供试品溶液，“2.6.4”项下的阴性对照溶液各10 μL，按“2.6.1”项下的色谱条件测定，记录色谱图，结果见图 1.分离效果好，阴性样品无干扰.

    • 2.6.6.   线性关系考察

  • 精密吸取“2.6.2”项下对照品溶液2 μL，4 μL，6 μL，8 μL，10 μL，按“2.6.1”项下的色谱条件测定.以牛蒡子苷元的进样量(x，μg)为横坐标，以峰面积(y)为纵坐标，进行线性回归，得线性范围为1.41 μg~7.05 μg，回归方程为y=3×108x-139 413，相关系数r=0.999 9.

    • 2.6.7.   精密度实验

  • 取“2.6.2”项下对照品溶液适量，按“2.6.1”项下色谱条件连续进样6次测定.结果牛蒡苷元峰面积的RSD为0.85%，表明仪器的精密度较好.

    • 2.6.8.   稳定性实验

  • 取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12，24 h后进样测定.结果牛蒡苷元峰面积的RSD为1.06%，表明供试品溶液在24 h内稳定.

    • 2.6.9.   重复性实验

  • 取同一样品6份，按“2.6.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.6.1”项下色谱条件测定.结果牛蒡苷元质量分数的RSD为0.74%，表明该方法的重复性比较好.

    • 2.6.10.   加样回收率

  • 实验取牛蒡子样品3份，分别精密加入一定量牛蒡子苷元的对照品，按“2.6.3”项下的方法制备牛蒡子供试品溶液，再按“2.6.1”项下的色谱条件进样并且计算加样回收率为2.19%(表 5).

    • 2.6.11.   样品质量分数测定

  • 取3批次牛蒡子配方颗粒适量，分别按“2.6.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.6.1”项下的色谱条件进样测定并计算其质量分数(表 6)，结果表明通过该方法制备的样品牛蒡子苷元质量分数基本稳定.

3.   结论

  • 本实验是笔者团队在牛蒡子系统研究的基础上，采用水煮法结合大孔树脂精制牛蒡子提取物，并对牛蒡子配方颗粒的制备工艺进行了正交优化实验，筛选出牛蒡子配方颗粒的最优制备工艺：物料比即牛蒡子提取物、糊精、淀粉比例为3:6:1，乙醇的浓度为85%，干燥温度为65 ℃.并采用HPLC法对牛蒡子颗粒剂中牛蒡子苷元进行质量分数方法学研究及样品质量分数测定，结果表明，通过大孔树脂精制处理，可以大大提高牛蒡子配方颗粒中有效成分牛蒡子苷元的质量分数.该结果以期为牛蒡子的制剂开发提供思路.

参考文献 (13)

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