脂质体法介导山羊精子转染外源DNA最适条件的研究

孙新明,魏泓,赵永聚,王爱平

西南大学学报（自然科学版）

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脂质体法介导山羊精子转染外源DNA最适条件的研究

孙新明,魏泓,赵永聚,王爱平. 脂质体法介导山羊精子转染外源DNA最适条件的研究[J]. 西南大学学报（自然科学版）, 2007, 29(6).

引用本文:

孙新明,魏泓,赵永聚,王爱平. 脂质体法介导山羊精子转染外源DNA最适条件的研究[J]. 西南大学学报（自然科学版）, 2007, 29(6).

Study on the Optimum Conditions for Sperm-Mediated DNA Transfer by Lipofection in Goats[J]. Journal of Southwest University Natural Science Edition, 2007, 29(6).

Citation:

Study on the Optimum Conditions for Sperm-Mediated DNA Transfer by Lipofection in Goats[J]. Journal of Southwest University Natural Science Edition, 2007, 29(6).

脂质体法介导山羊精子转染外源DNA最适条件的研究

孙新明,魏泓,赵永聚,王爱平

井冈山学院医学院,解剖教研室,江西,吉安,343000,第三军医大学,基础部实验动物学教研室,重庆,400038,西南大学,动物科技学院,重庆,400716

Study on the Optimum Conditions for Sperm-Mediated DNA Transfer by Lipofection in Goats

摘要: 研究了阳离子脂质体介导山羊精子转染外源DNA的方法、效果及其影响因素以确定其最适转染条件,为进一步用此方法生产转基因动物提供参考.结果显示:①脂质体介导法可用于山羊精子转染外源DNA;②脂质体介导转染1、2、3号公羊的精子消化后阳性率分别为25.2，,22.6，,27.5，,差异不显著(p＞0.05).③脂质体介导转染的精子消化前后阳性率在充分洗涤组为41.3，和25.5，,极显著高于原精液直接加入1:10:1转染液不洗涤处理组的25.6，和11.4，及原精液加入不含缓冲液的转染液处理组的17.2，和7.8，(p＜0.01).④离心洗涤后精液分别与在转染缓冲液中加入0、0.1，、0.3，、0.6， BSA(质量/体积)的转染液共同孵育后的消化前后阳性率分别为41.3，和25.5，、35，和21.4，、27.5，和15.3，及11.2，和8.2，;⑤用不同缓冲液配制的转染液进行脂质体介导山羊精子转染外源DNA的效率有差异,其中以mDM液转染精子的消化前、后阳性率最高(为41.3，和25.5，).研究表明:脂质体介导转染外源DNA的独特机制使供精个体间精子转染效率趋于一致;精子与脂质体-DNA复合物混合前将精子充分离心洗涤可显著提高脂质体介导精子转染外源DNA的效率;血清白蛋白能降低脂质体对精子介导的转染效率;脂质体法介导山羊转染外源DNA的最适转染条件为用mDM液充分洗涤精子后再与脂质体-DNA复合物混合转染.
- 精子介导基因转移,脂质体,山羊

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脂质体法介导山羊精子转染外源DNA最适条件的研究

孙新明,魏泓,赵永聚,王爱平

井冈山学院医学院,解剖教研室,江西,吉安,343000,第三军医大学,基础部实验动物学教研室,重庆,400038,西南大学,动物科技学院,重庆,400716

关键词:

精子介导基因转移,脂质体,山羊

摘要: 研究了阳离子脂质体介导山羊精子转染外源DNA的方法、效果及其影响因素以确定其最适转染条件,为进一步用此方法生产转基因动物提供参考.结果显示:①脂质体介导法可用于山羊精子转染外源DNA;②脂质体介导转染1、2、3号公羊的精子消化后阳性率分别为25.2，,22.6，,27.5，,差异不显著(p＞0.05).③脂质体介导转染的精子消化前后阳性率在充分洗涤组为41.3，和25.5，,极显著高于原精液直接加入1:10:1转染液不洗涤处理组的25.6，和11.4，及原精液加入不含缓冲液的转染液处理组的17.2，和7.8，(p＜0.01).④离心洗涤后精液分别与在转染缓冲液中加入0、0.1，、0.3，、0.6， BSA(质量/体积)的转染液共同孵育后的消化前后阳性率分别为41.3，和25.5，、35，和21.4，、27.5，和15.3，及11.2，和8.2，;⑤用不同缓冲液配制的转染液进行脂质体介导山羊精子转染外源DNA的效率有差异,其中以mDM液转染精子的消化前、后阳性率最高(为41.3，和25.5，).研究表明:脂质体介导转染外源DNA的独特机制使供精个体间精子转染效率趋于一致;精子与脂质体-DNA复合物混合前将精子充分离心洗涤可显著提高脂质体介导精子转染外源DNA的效率;血清白蛋白能降低脂质体对精子介导的转染效率;脂质体法介导山羊转染外源DNA的最适转染条件为用mDM液充分洗涤精子后再与脂质体-DNA复合物混合转染.