CyclinE基因siRNA真核载体的构建及干扰效果的初步鉴定

陈济,潘巍巍,魏丽丽,袁成福,易发平,卜友泉,宋方洲

西南大学学报（自然科学版）

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CyclinE基因siRNA真核载体的构建及干扰效果的初步鉴定

陈济,潘巍巍,魏丽丽,袁成福,易发平,卜友泉,宋方洲. CyclinE基因siRNA真核载体的构建及干扰效果的初步鉴定[J]. 西南大学学报（自然科学版）, 2008, 30(1).

引用本文:

陈济,潘巍巍,魏丽丽,袁成福,易发平,卜友泉,宋方洲. CyclinE基因siRNA真核载体的构建及干扰效果的初步鉴定[J]. 西南大学学报（自然科学版）, 2008, 30(1).

Construction of siRNA Eukaryotic Vector of Cyclin E Gene and Preliminary Identification of Its Interference Efficiency[J]. Journal of Southwest University Natural Science Edition, 2008, 30(1).

Citation:

Construction of siRNA Eukaryotic Vector of Cyclin E Gene and Preliminary Identification of Its Interference Efficiency[J]. Journal of Southwest University Natural Science Edition, 2008, 30(1).

CyclinE基因siRNA真核载体的构建及干扰效果的初步鉴定

陈济,潘巍巍,魏丽丽,袁成福,易发平,卜友泉,宋方洲

重庆医科大学,生物化学与分子生物学教研室,临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆,400016

Construction of siRNA Eukaryotic Vector of Cyclin E Gene and Preliminary Identification of Its Interference Efficiency

摘要: 根据CyclinE(细胞周期蛋白E)基因序列,设计siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带U6启动子真核表达载体,构建针对CyclinE基因的shRNA真核表达载体.酶切和测序鉴定确认载体构建成功后,脂质体法转染宫颈癌HeLa细胞,观察绿色荧光蛋白表达检测转染效率,RT-PCR法检测载体对CyclinE基因的表达抑制效果.实验结果显示CyclinE基因的RNAi真核表达载体构建成功,转入HeLa细胞后可以特异抑制细胞中CyclinE基因的表达.其中靶向(+797～+819)位点的质粒干扰效果较好,基因表达抑制率为59，.这些结果为利用该载体抑制CyclinE基因进行宫颈癌基因治疗研究奠定了基础.
- RNA干扰,细胞周期蛋白E,HeLa细胞,细胞周期

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CyclinE基因siRNA真核载体的构建及干扰效果的初步鉴定

陈济,潘巍巍,魏丽丽,袁成福,易发平,卜友泉,宋方洲

重庆医科大学,生物化学与分子生物学教研室,临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆,400016

关键词:

RNA干扰,细胞周期蛋白E,HeLa细胞,细胞周期

摘要: 根据CyclinE(细胞周期蛋白E)基因序列,设计siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带U6启动子真核表达载体,构建针对CyclinE基因的shRNA真核表达载体.酶切和测序鉴定确认载体构建成功后,脂质体法转染宫颈癌HeLa细胞,观察绿色荧光蛋白表达检测转染效率,RT-PCR法检测载体对CyclinE基因的表达抑制效果.实验结果显示CyclinE基因的RNAi真核表达载体构建成功,转入HeLa细胞后可以特异抑制细胞中CyclinE基因的表达.其中靶向(+797～+819)位点的质粒干扰效果较好,基因表达抑制率为59，.这些结果为利用该载体抑制CyclinE基因进行宫颈癌基因治疗研究奠定了基础.