p E G F P - N 3 - L P L重组真核表达载体的构建及在V e r o细胞中的表达

赵佳福,许厚强,乜玉丽,陈祥,张勇

西南大学学报（自然科学版）

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p E G F P - N 3 - L P L重组真核表达载体的构建及在V e r o细胞中的表达

赵佳福,许厚强,乜玉丽,陈祥,张勇. p E G F P - N 3 - L P L重组真核表达载体的构建及在V e r o细胞中的表达[J]. 西南大学学报（自然科学版）, 2012, 34(4): 040-045.

引用本文:

赵佳福,许厚强,乜玉丽,陈祥,张勇. p E G F P - N 3 - L P L重组真核表达载体的构建及在V e r o细胞中的表达[J]. 西南大学学报（自然科学版）, 2012, 34(4): 040-045.

C o n s t r u c t i o no fR e c o m b i n a n tE u k a r y o t i cE x p r e s s i o nV e c t o ro fp E G F P - N 3 - L P Lw i t hE f f i c i e n tE x p r e s s i o n s i nV e r oC e l s[J]. Journal of Southwest University Natural Science Edition, 2012, 34(4): 040-045.

Citation:

C o n s t r u c t i o no fR e c o m b i n a n tE u k a r y o t i cE x p r e s s i o nV e c t o ro fp E G F P - N 3 - L P Lw i t hE f f i c i e n tE x p r e s s i o n s i nV e r oC e l s[J]. Journal of Southwest University Natural Science Edition, 2012, 34(4): 040-045.

p E G F P - N 3 - L P L重组真核表达载体的构建及在V e r o细胞中的表达

赵佳福,许厚强,乜玉丽,陈祥,张勇

高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州大学,贵阳5 5 0 0 2 5

C o n s t r u c t i o no fR e c o m b i n a n tE u k a r y o t i cE x p r e s s i o nV e c t o ro fp E G F P - N 3 - L P Lw i t hE f f i c i e n tE x p r e s s i o n s i nV e r oC e l s

摘要: 目的:构建贵州白香猪L P L基因与增强型绿色荧光蛋白基因的融合表达载体p E G F P - N 3 - L P L,转染V e r o细胞,观察重组质粒的表达.方法:采用H i n d Ⅲ和B a mH Ⅰ两种限制性内切酶获得L P L基因编码区片段和p E G F P - N 3线型载体,将目的片段与该载体连接、转化、挑取阳性克隆,进行菌落P C R、双酶切及测序鉴定.使用L i p o f e c t a m i n e2 0 0 0将重组质粒转染V e r o细胞,观察细胞中绿色荧光蛋白的表达并对其进行mR NA检测.结果:成功构建重组真核表达载体p E G F P - N 3 - L P L,经mR NA检测,实验组在15 0 0b p处出现特异性条带,说明重组载体已在V e r o细胞中获得表达.结论:本试验构建的真核细胞表达载体p E G F P - N 3 - L P L,为进一步阐明L P L基因与肌内脂肪沉积间的生物学作用机制奠定了基础.
- 脂蛋白酯酶 /
- pEGFP-N3载体 /
- Vero细胞 /
- 真核表达 /
- 荧光检测

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p E G F P - N 3 - L P L重组真核表达载体的构建及在V e r o细胞中的表达

赵佳福,许厚强,乜玉丽,陈祥,张勇

高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州大学,贵阳5 5 0 0 2 5

关键词:

摘要: 目的:构建贵州白香猪L P L基因与增强型绿色荧光蛋白基因的融合表达载体p E G F P - N 3 - L P L,转染V e r o细胞,观察重组质粒的表达.方法:采用H i n d Ⅲ和B a mH Ⅰ两种限制性内切酶获得L P L基因编码区片段和p E G F P - N 3线型载体,将目的片段与该载体连接、转化、挑取阳性克隆,进行菌落P C R、双酶切及测序鉴定.使用L i p o f e c t a m i n e2 0 0 0将重组质粒转染V e r o细胞,观察细胞中绿色荧光蛋白的表达并对其进行mR NA检测.结果:成功构建重组真核表达载体p E G F P - N 3 - L P L,经mR NA检测,实验组在15 0 0b p处出现特异性条带,说明重组载体已在V e r o细胞中获得表达.结论:本试验构建的真核细胞表达载体p E G F P - N 3 - L P L,为进一步阐明L P L基因与肌内脂肪沉积间的生物学作用机制奠定了基础.