p E G F P - N 3 - L P L重组真核表达载体的构建及在V e r o细胞中的表达
C o n s t r u c t i o no fR e c o m b i n a n tE u k a r y o t i cE x p r e s s i o nV e c t o ro fp E G F P - N 3 - L P Lw i t hE f f i c i e n tE x p r e s s i o n s i nV e r oC e l s
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摘要: 目的:构建贵州白香猪L P L基因与增强型绿色荧光蛋白基因的融合表达载体p E G F P - N 3 - L P L,转染V e r o细胞,观察重组质粒的表达.方法:采用H i n d Ⅲ和B a mH Ⅰ两种限制性内切酶获得L P L基因编码区片段和p E G F P - N 3线型载体,将目的片段与该载体连接、转化、挑取阳性克隆,进行菌落P C R、双酶切及测序鉴定.使用L i p o f e c t a m i n e2 0 0 0将重组质粒转染V e r o细胞,观察细胞中绿色荧光蛋白的表达并对其进行mR NA检测.结果:成功构建重组真核表达载体p E G F P - N 3 - L P L,经mR NA检测,实验组在15 0 0b p处出现特异性条带,说明重组载体已在V e r o细胞中获得表达.结论:本试验构建的真核细胞表达载体p E G F P - N 3 - L P L,为进一步阐明L P L基因与肌内脂肪沉积间的生物学作用机制奠定了基础.
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关键词:
- 脂蛋白酯酶 /
- pEGFP-N3载体 /
- Vero细胞 /
- 真核表达 /
- 荧光检测
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