中华大蟾蜍g a l e c t i n - 3c D N A的克隆、序列分析及原核表达载体的构建

徐跃,宋敏国,杨仙玉,袁进强

西南大学学报（自然科学版）

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中华大蟾蜍g a l e c t i n - 3c D N A的克隆、序列分析及原核表达载体的构建

徐跃,宋敏国,杨仙玉,袁进强. 中华大蟾蜍g a l e c t i n - 3c D N A的克隆、序列分析及原核表达载体的构建[J]. 西南大学学报（自然科学版）, 2012, 34(4): 046-052.

引用本文:

C l o n i n ga n dS e q u a n c i n go fB u f og a r g a r i z a n sG a l e c t i n - 3c D N Aa n dt h eC o n s t r u c t i o no f t h eV e c t o r f o r I t sP r o k a y o t i cE x p r e s s i o n[J]. Journal of Southwest University Natural Science Edition, 2012, 34(4): 046-052.

Citation:

C l o n i n ga n dS e q u a n c i n go fB u f og a r g a r i z a n sG a l e c t i n - 3c D N Aa n dt h eC o n s t r u c t i o no f t h eV e c t o r f o r I t sP r o k a y o t i cE x p r e s s i o n[J]. Journal of Southwest University Natural Science Edition, 2012, 34(4): 046-052.

中华大蟾蜍g a l e c t i n - 3c D N A的克隆、序列分析及原核表达载体的构建

徐跃,宋敏国,杨仙玉,袁进强

浙江农林大学林业与生物技术学院,浙江临安3 1 1 3 0 0

C l o n i n ga n dS e q u a n c i n go fB u f og a r g a r i z a n sG a l e c t i n - 3c D N Aa n dt h eC o n s t r u c t i o no f t h eV e c t o r f o r I t sP r o k a y o t i cE x p r e s s i o n

摘要: 通过P C R扩增出中华大蟾蜍B u f og a r g a r i z a n s半乳糖凝聚素3(g a l - 3) c D NA全长开放读码框( O R F) 并克隆至p GM - T载体,经D NA测序确定获得全长O R F序列( G e n B a n k登录号为J N 9 9 3 7 3 3).序列分析表明中华大蟾蜍g a l - 3的O R F是由7 8 9个碱基组成,编码2 6 2个氨基酸残基组成的蛋白质.推导氨基酸序列同源性比较发现,中华大蟾蜍与非洲爪蟾X e n o p u s l a v i s同源性最高,为5 1%,与其他1 0种动物的同源性在4 1%~5 0%之间. S MA R T分析显示g a l - 3蛋白在1 3 6 - 2 5 9位氨基酸存在保守的半乳糖结合域.N e tP h o s预测g a l - 3在S e r - 6和S e r - 1 8 6有潜在的丝氨酸磷酸化位点. g a l - 3氨基酸序列构建的进化树符合传统动物分类学特点.经菌落P C R、双酶切和D NA测序确认g a l - 3的O R F正确插入原核表达载体p E T - 2 8 b,表明原核表达用重组质粒构建成功,为研究其蛋白功能和生物学功能奠定了基础.
- 中华大蟾蜍 /
- 半乳糖凝聚素3 /
- 基因克隆 /
- 原核表达载体构建

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中华大蟾蜍g a l e c t i n - 3c D N A的克隆、序列分析及原核表达载体的构建

徐跃,宋敏国,杨仙玉,袁进强

浙江农林大学林业与生物技术学院,浙江临安3 1 1 3 0 0

关键词:

摘要: 通过P C R扩增出中华大蟾蜍B u f og a r g a r i z a n s半乳糖凝聚素3(g a l - 3) c D NA全长开放读码框( O R F) 并克隆至p GM - T载体,经D NA测序确定获得全长O R F序列( G e n B a n k登录号为J N 9 9 3 7 3 3).序列分析表明中华大蟾蜍g a l - 3的O R F是由7 8 9个碱基组成,编码2 6 2个氨基酸残基组成的蛋白质.推导氨基酸序列同源性比较发现,中华大蟾蜍与非洲爪蟾X e n o p u s l a v i s同源性最高,为5 1%,与其他1 0种动物的同源性在4 1%~5 0%之间. S MA R T分析显示g a l - 3蛋白在1 3 6 - 2 5 9位氨基酸存在保守的半乳糖结合域.N e tP h o s预测g a l - 3在S e r - 6和S e r - 1 8 6有潜在的丝氨酸磷酸化位点. g a l - 3氨基酸序列构建的进化树符合传统动物分类学特点.经菌落P C R、双酶切和D NA测序确认g a l - 3的O R F正确插入原核表达载体p E T - 2 8 b,表明原核表达用重组质粒构建成功,为研究其蛋白功能和生物学功能奠定了基础.